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小美超聲高通量聲波基因組剪切儀與 bioruptor非接觸式超聲破碎儀用于全基因組DNA 200-500bp片段化的實(shí)驗(yàn)探究
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>將全基因組DNA樣品進(jìn)行200-500bp區(qū)間的均一性片段化處理。
實(shí)驗(yàn)儀器及材料:
1.實(shí)驗(yàn)儀器:本次實(shí)驗(yàn)選用三款非接觸打斷儀器如下:小美超聲-高通量聲波基因組剪切儀、bioruptor-非接觸式超聲破碎儀、小美超聲-聚能式超聲波DNA打斷儀。
2.實(shí)驗(yàn)材料:核酸濃度為160 ng/μL的全基因組DNA溶液。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1.提前15分鐘將三款儀器的冷水機(jī)啟動(dòng),設(shè)置溫度為4℃。
2.將每個(gè)愛思進(jìn)品牌的1.5 mL EP管加入100 μL 濃度為160 ng/μL的全基因組DNA溶液。
3.將2管裝好樣品的1.5 mL EP 管分別放入三款儀器的適配器當(dāng)中,其他空余的孔位由加同樣體積水的1.5 mL EP 管補(bǔ)齊。
4.程序設(shè)置:溫度4℃,超聲工作時(shí)間20s 間隔時(shí)間10s,總時(shí)長(zhǎng)15分鐘和20分鐘,二個(gè)梯度對(duì)比。
5.程序結(jié)束后,取出樣品使用毛細(xì)管電泳進(jìn)行基因組片段化檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
1.小美超聲-高通量聲波基因組剪切儀
①程序設(shè)置:溫度4℃,超聲工作時(shí)間20s 間隔時(shí)間10s,總時(shí)長(zhǎng)15分鐘
平均片段大小:310.0 bp
②程序設(shè)置:溫度4℃,超聲工作時(shí)間20s 間隔10s,總時(shí)長(zhǎng)20分鐘
平均片段大小:300.1 bp
2.bioruptor-非接觸式超聲破碎儀
①程序設(shè)置:溫度4℃,超聲工作時(shí)間20s 間隔時(shí)間10s,總時(shí)長(zhǎng)15分鐘
平均片段大小:432.9 bp
②程序設(shè)置:溫度4℃,超聲工作時(shí)間20s 間隔時(shí)間10s,總時(shí)長(zhǎng)20分鐘
平均片段大小:405.8 bp
3.小美超聲-聚能式超聲波DNA打斷儀
①程序設(shè)置:溫度4℃,超聲工作時(shí)間20s 間隔時(shí)間10s,總時(shí)長(zhǎng)15分鐘
平均片段大小:365.5 bp
②程序設(shè)置:溫度4℃,超聲工作時(shí)間20s 間隔時(shí)間10s,總時(shí)長(zhǎng)20分鐘
平均片段大小:388.1 bp
4.三款儀器實(shí)驗(yàn)結(jié)果匯總
總時(shí)長(zhǎng)15分鐘 | 總時(shí)長(zhǎng)20分鐘 | 峰圖趨勢(shì) | |
小美超聲-高通量聲波基因組剪切儀 | 64.7% | 64.3% | 平緩 |
bioruptor-非接觸式超聲破碎儀 | 58.3% | 63.2% | 陡坡 |
小美超聲-聚能式超聲波DNA打斷儀 | 65.4% | 62.2% | 陡坡 |
注:當(dāng)基因組片段在200-500 bp區(qū)間占比越高,峰圖越平緩狀時(shí),說(shuō)明基因組片段的均一性更好,反之亦然。
在樣品、程序設(shè)定等條件相同的情況下,bioruptor的非接觸式超聲破碎儀和小美超聲的聚能式超聲波DNA打斷儀在200-500 bp區(qū)間占比分別達(dá)到58.3%和65.4%,且二者峰圖呈陡坡狀,表明基因組片段化均一性差。
小美超聲的高通量聲波基因組剪切儀在200-500 bp區(qū)間占比達(dá)到64.7%,峰圖呈平緩狀,表明基因組片段均一性更好。
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